ChIP-IT® Express 染色质免疫共沉淀试剂盒

染色质免疫沉淀技术（Chromatin Immunoprecipitation，简称ChIP）是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。其原理是：在生理状态下用甲醛把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起，通过超声或酶处理将染色质切为均一的小片段后，利用抗原抗体的特异性识别反应，使用DNA结合蛋白特异性的抗体将目的蛋白和DNA复合物沉淀下来。复合物经过洗涤，解交联，蛋白酶K消化去除DNA结合蛋白，经纯化得到感兴趣的DNA片段。纯化的DNA片段可用于后续的分析，比如qPCR，测序，ChIP-chip，ChIP re ChIP等。

Active motif公司的ChIP-IT^® Express试剂盒使用protein G包被的磁珠，代替传统的琼脂糖珠，使得ChIP实验可以在1天之内完成。试剂盒可以使用超声法或酶切法进行染色质的断裂处理。每种方法都提供快速、可重复的操作步骤，省时省力，实验者更容易获得成功的ChIP结果。

图1 ChIP-IT^® Express试剂盒的操作流程

ChIP-IT^® Express试剂盒的优点
● 组分完整——提供ChIP实验所需的所有试剂；
● 可用于检测蛋白/DNA的相互作用，不仅仅限于组蛋白的修饰；
● 与全基因组分析或PCR相关的方法兼容；
● 无需进行试剂和操作步骤的优化；
● 无需酚/氯仿抽提步骤——试剂盒包含DNA纯化柱，可对DNA进行快速纯化

传统的ChIP实验都是使用染色质组成相关的抗体，如乙酰化组蛋白抗体。然而对于启动子转录活性分析而言，这无法揭示出是哪种转录因子结合到我们感兴趣的启动子上。相比之下，使用转录因子特异性抗体，能够直接监测转录因子和DNA的相互作用，但是这种技术与传统的ChIP相比具有更大的挑战，需要准备多种复杂的缓冲液，抑制剂混合物和封闭试剂等。而且在缺少抗体、对照和验证的实验流程下，很难对ChIP结果进行验证。为了解决这些问题，使得ChIP实验同时适用于转录因子和组蛋白，Active motif公司的ChIP-IT^® Express试剂盒提供ChIP实验所需的所有试剂，包括阳性对照和阴性对照，使得研究者更容易成功的操作ChIP。

图2: 改良的ChIP(使用ChIP-IT Express试剂盒)

PCR分析ChIP后的DNA。典型的ChIP实验每次需要2000,000个细胞，使用ChIP-IT Express试剂盒，仅需要100,000或更少的细胞既可获得阳性的ChIP结果。
用1%的甲醛固定Hela细胞10分钟，使用超声法破碎染色质，使用阴性对照IgG和RNA pol II抗体，对不同细胞数量来源（100,000到750,000个细胞）的染色质进行ChIP，重复2次。使用阳性对照引物GAPDH对ChIP后的DNA进行36个循环的PCR分析（抗体和引物包含在人ChIP-IT对照试剂盒里，Active motif也可以提供小鼠和大鼠对照试剂盒）。取10ul PCR产物进行1%凝胶电泳，EB染色后紫外观察。结果显示与使用阴性对照IgG相比，使用RNA pol II抗体的ChIP大量富集了GAPDH启动子区域的DNA序列。

相关产品信息

供货商	产品编号	产品名称	规格
Active Motif	53008	ChIP-IT^® Express	25 rxns
Active Motif	53009	ChIP-IT^® Express Enzymatic	25 rxns

除此之外，Active motif公司还提供特殊应用的ChIP试剂盒以及多种ChIP相关的的辅产品。

供货商	产品编号	产品名称	规格	产品说明
Active Motif	53014	ChIP-IT^® Protein G Magnetic Beads	25 rxns	Protein G包被的磁珠
Active Motif	53016	Re-ChIP-IT^®	25 rxns	双重ChIP
Active Motif	53018	ChIP-IT^®Express HT	96 rxns	高通量ChIP,一次可同时使用96分样本
Active Motif	53019	Ready-to-ChIP Hep G2 Chromatin	10 rxns	即用型的ChIP实验用染色质
Active Motif	53020	Ready-to-ChIP K-562 Chromatin	10 rxns
Active Motif	53021	Ready-to-ChIP NIH/3T3 Chromatin	10 rxns
Active Motif	53015	Ready-to-ChIP HeLa Chromatin	10 rxns
Active Motif	53026	ChIP-IT^® Control qPCR Kit – Human	5 rxns	ChIP对照试剂盒，包含阴性对照IgG和阳性对照 RNA pol II抗体和PCR引物
Active Motif	53027	ChIP-IT^®Control qPCR Kit – Mouse	5 rxns
Active Motif	53028	ChIP-IT^® Control qPCR Kit – Rat	5 rxns
Active Motif	53010	ChIP-IT^®Control Kit – Human	5 rxns
Active Motif	53011	ChIP-IT^® Control Kit – Mouse	5 rxns
Active Motif	53012	ChIP-IT^® Control Kit – Rat	5 rxns
Active Motif	53032	ChIP-IT^® Express Shearing Kit	10 rxns	超声法染色质处理试剂盒
Active Motif	53035	ChIP-IT^®Express Enzymatic Shearing Kit	10 rxns	酶切法染色质处理试剂盒
Active Motif	53040	ChIP-IT^® High Sensitivity	16 rxns	高灵敏ChIP试剂盒，适用于低丰度转录因子、低亲和力抗体或有限的样本
Active Motif	53041	ChIP-IT^®ChIP-Seq	10 libraries	ChIP-Seq剂盒
Active Motif	53045	ChIP-IT^® FFPE	16 rxns	适用于福尔马林固定，石蜡包埋组织样本的ChIP
Active Motif	53042	ChIP-IT^® PBMC	16 rxns	适用于外周血单核细胞的ChIP
Active Motif	53024	RNA ChIP-IT^®	25 rxns	用于研究RNA与细胞核染色质的相互作用