Active motif公司生产的Histone H3 PTM Multiplex试剂盒是目前市场上唯一一个可用于组蛋白转录后修饰多重分析的试剂盒。该产品基于Luminex® xMAP技术，可用于分析同一细胞裂解物或纯化的组蛋白样本中Histone 3的多种修饰水平。
图1 Histone H3 PTM Multiplex试剂盒检测原理
样本加入到96孔滤膜版，每孔加入带有不同萤光颜色的磁珠，每种颜色的磁珠上已经预包被好不同的抗组蛋白修饰抗体，样本中不同修饰的Histone H3会被相应的磁珠捕获，使用96孔磁力板洗板，去除样本中未结合的物质；每孔再加入生物素标记的抗Histone H3抗体，用以识别样本中被磁珠捕获的Histone，再次洗板去除未结合的生物素抗体，每孔加入streptavidin-phycoerythrin (SA-PE)可特异性结合到生物素标记的Histone H3抗体，PE信号的强弱反映样本中Histone H3的含量水平（图1）。洗板去除未结合的SA-PE，重悬磁珠，使用MAGPIX™, Luminex® 200™ 或FLEXMAP 3D™仪器和xPONENT®软件读取数据。
Histone H3 PTM Multiplex试剂盒的组成
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货号
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产品名称
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规格
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描述
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33115
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Histone PTM Multiplex Kit
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96 rxns
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包含实验所需的所有buffer,蛋白酶、
磷酸酶和去乙酰、化酶抑制剂, 生物 素化的抗Histone H3 抗体,streptavidin -phycoerythrin ,96-well plate. |
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33116
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Histone H3 Total Ab-
conjugated Beads |
48 rxns
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可以任意选择搭配，每种bead
set都含有一个阳性对照 |
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Histone H3K9ac Ab-
conjugated Beads |
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Histone H3K9me1 Ab-
conjugated Beads |
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33119
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Histone H3K9me2 Ab-
conjugated Beads |
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33120
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Histone H3K9me3 Ab-
conjugated Beads |
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33121
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Histone H3K4me3 Ab-
conjugated Beads |
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33122
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Histone H3S10ph Ab-
conjugated Beads |
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33123
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Histone H3 pan-acetyl Ab-
conjugated Beads |
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33124
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Histone H3K27me2 Ab-
conjugated Beads |
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33125
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Histone H3K27me3 Ab-
conjugated Beads |
Histone H3 PTM Multiplex试剂盒的优点
● 唯一的可用于组蛋白H3多重分析的试剂盒；
● 客户可根据自己的实验需求挑选不同的beads进行组合分析；
● 只需要ng级的样本，可在同一孔内分析多个组蛋白H3修饰水平；
● 提供的Histone H3 Total Ab-conjugated Beads 可用于对不同修饰的组蛋白H3进行半定量分析
● 最多可同时分析10种组蛋白；
● 操作时间仅需3小时；
● 适用于高通量分析，与传统的分析方法如WB,IHC相比，更节省时间。
图2 Western blot和Histone H3 PTM Assay 检测H3S10ph的结果对比
使用Western blot （上图）和Histone H3 PTM Assay （下图）分析未处理和秋水仙胺处理的HeLa细胞提取物中总Histone H3以及H3S10ph的表达水平。Western 无法实现高通量，需要ug级的样本量，而且不能实现多重检测以及数据的标准化处理；相反，Histone H3 PTM Assay 可以实现仅需ng级的样本即可完成多重检测以及可重复的高通量检测，可以通过与总的Histone H3含量的对比，反映样本间H3S10ph水平的变化。
图3 纯化的组蛋白Histone样本可以提高Histone H3 PTM Assay 检测的灵敏度
与粗提取物（橘黄色曲线）相比，经Active motif公司的组蛋白纯化试剂盒（货号40025）纯化后的组蛋白样本（紫色曲线），使用Histone H3 PTM Assay检测H3K27me3具有到更低的检测限。
图4 与肿瘤相关的组蛋白转录后修饰
