FluoroSpot荧光免疫斑点实验可用于单细胞水平上检测多种细胞因子的分泌。和ELISpot一样，是一种灵敏、操作简单的方法。在FluoroSpot实验中，不同细胞因子的单抗混合物用到了夹心法中。不同于ELISpot，FluoroSpot使用的是荧光标记的检测试剂。一种分析物用生物素化抗体检测，另外一种分析物使用tag标记的抗体检测。这种实验方法的设计保证了可以在同一孔内进行2种细胞因子的检测。接下来使用红色荧光标记的Streptavidin和绿色荧光标记的抗tag抗体进行信号的级联放大。使用自动荧光读板仪分析产生的2种颜色的荧光斑点并生成图像。图像叠加后上显示在相同位置的荧光斑点表示为同时分泌2种细胞因子的细胞。
图1 FluoroSpot检测原理 图2 白色念珠菌提取物处理和未处理的PBMC细胞(300,000
cells/well)过夜培养后，使用FluoroSpot检测分泌 IFN-γ 和 /
图1 FluoroSpot检测原理 图2 白色念珠菌提取物处理和未处理的PBMC细胞(300,000
cells/well)过夜培养后，使用FluoroSpot检测分泌 IFN-γ 和 /
或IL-22的细胞。使用AID (Autoimmun Diagnostika GmbH)
公司的iSpot分析仪进行斑点分析。在FITC (IFN-γ) 和 Cy3
(IL-22)叠加图片上相同位置显示的斑点表示为同时分泌IFN-γ
和 IL-22的细胞。
公司的iSpot分析仪进行斑点分析。在FITC (IFN-γ) 和 Cy3
(IL-22)叠加图片上相同位置显示的斑点表示为同时分泌IFN-γ
和 IL-22的细胞。
FluoroSpot试剂盒信息
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人FluoroSot试剂盒
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产品名称
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编号
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供应商
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Human IgG/IgA FluoroSpot kit
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FS-05R06G
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Mabtech
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Human IgG/IgM FluoroSpot kit
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FS-05R17G
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Mabtech
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Human IgG/IgA/IgM FluoroSpot kit
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FS-050617
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Mabtech
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Human IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot kit
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FS-0110
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Mabtech
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Human IFN-γ/Granzyme B FluoroSpot kit, pre-coated
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FSP-0110
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Mabtech
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Human IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit
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FS-0102
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Mabtech
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Human IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit, pre-coated
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FSP-0102
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Mabtech
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Human IFN-γ/IL-5 FluoroSpot kit
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FS-0108
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Mabtech
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Human IFN-γ/IL-13 FluoroSpot kit
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FS-0104
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Mabtech
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Human IFN-γ/IL-17A FluoroSpot kit
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FS-0103
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Mabtech
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Human IFN-γ/IL-22 FluoroSpot kit
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FS-0118
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Mabtech
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Human IL-1β/GM-CSF FluoroSpot kit
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FS-1215
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Mabtech
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Human IL-1β/IL-6 FluoroSpot kit
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FS-1213
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Mabtech
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Human IL-1β/IL-12/-23 (p40) FluoroSpot kit
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FS-1214
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Mabtech
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Human IL-1β/TNF-α FluoroSpot kit
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FS-1209
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Mabtech
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Human IL-6/GM-CSF FluoroSpot kit
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FS-1315
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Mabtech
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Human IL-6/IL-12/-23 (p40) FluoroSpot kit
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FS-1314
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Mabtech
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Human IL-6/TNF-α FluoroSpot kit
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FS-1309
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Mabtech
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Human TNF-α/GM-CSF FluoroSpot kit
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FS-0915
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Mabtech
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Human TNF-α/IL-12/-23 (p40) FluoroSpot kit
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FS-0914
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Mabtech
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猴FluoroSot试剂盒
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Monkey IgG/IgA FluoroSpot kit
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FS-05R24G
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Mabtech
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Monkey IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit
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FS-2122
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Mabtech
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小鼠FluoroSot试剂盒
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Mouse IFN-γ/IL-2 FluoroSpot kit
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FS-4142
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Mabtech
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Mouse IFN-γ/IL-5 FluoroSpot kit
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FS-4143
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Mabtech
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Mouse IFN-γ/IL-17A FluoroSpot kit
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FS-4144
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Mabtech
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*注意事项
1. 使用抗CD28抗体对CD28共刺激，可以提高IL-2的分泌
在FluoroSpot实验中，捕获抗体对细胞因子的捕获可能会影响细胞因子的分泌。板孔里包被的IL-2捕获抗体能够降低游离IL-2的分泌，而游离IL-2对T细胞活化是必须的。为了补偿这种影响，可使用抗CD28单抗进行共刺激，在合适的浓度下可以增加特异性抗原的分泌而不会增加自然分泌。其他细胞因子也有可能会受到捕获抗体的影响，因此使用抗CD28抗体刺激在很多情况下可以有效的解决这个问题。
2.建议使用带分离滤光片的自动读板仪分析
建议使用带FITC和Cy3滤光片的自动荧光ELISpot分析仪仪分析FluoroSpot。为了准确的检测2种细胞因子分泌的细胞，分析仪需要具有对2种滤光片获得的信号进行叠加分析的能力。
