Global DNA Methylation - LINE-1试剂盒用于检测人类基因组DNA中重复元件LINE-1(Long Interspersed Nucleotide Element 1)的甲基化水平。LINE-1的甲基化可反映整个基因组DNA甲基化的水平，因此可利用LINE-1的甲基化来比较不同的样本类型、处理条件、临床预后、饮食习惯或环境背景下5-mC甲基化水平的相对变化。
Global Methylation - LINE-1试剂盒的原理
首先将感兴趣的基因组DNA用内切酶MseI消化，然后与生物素标记的human LINE-1探针进行杂交。杂交的DNA会被包被在96孔板上的streptavidin捕获，未结合探针的DNA将被洗涤去除。再使用5-mC抗体和HRP标记的二抗来检测甲基化的DNA片段。使用酶标仪可以很容易的在450nm下读取比色值。
人类基因组上包含约45%的重复元件，其中LINE-1占17-18%。通过HPLC或结合重亚硫酸盐的限制性分析（COBRA）和焦磷酸测序分析对比发现，LINE-1重复元件的甲基化状态与基因组5-mC甲基化的水平非常一致。LINE-1的高度甲基化增加了多种疾病发生的风险，包括肿瘤、中风和心脏病，而且被认为是神经胶质瘤的一个预后因素。
Global DNA Methylation - LINE-1试剂盒的组成
该试剂盒提供优化的操作步骤和充足的试剂用于制备DNA片段、杂交，以及在一块可拆卸的96孔内进行捕获及显色来检测5-mC甲基化。为方便使用，试剂盒同时包括含已知甲基化水平的LINE-1甲基化和非甲基化对照DNA。通过绘制标准曲线，可以检测出每份DNA样品中相应的5-mC甲基化水平。
| ● LINE-1 Probe (2.5 μM); Store at -20°C | ● 20X Wash Buffer; Store at 4°C |
| ● MseI enzyme (10 U/μl); Store at -20°C | ● 96-well Streptavidin plate; Store at 4°C |
| ● 10X MseI Reaction Buffer; Store at -20°C | ● Developing Solution; Store at 4°C |
| ● Methylated DNA Standard (10 ng/μl); Store at -20°C | ● Stop Solution; Store at RT |
| ● Non-methylated DNA Standard (10 ng/μl); Store at -20°C | ● 5X Hybridization Buffer; Store at RT |
| ● 5-Methylcytosine mAb; Store at -20°C | ● 10X Buffer W; Store at RT |
| ● Anti-mouse HRP-conj. secondary Ab; Store at 4°C | ● Plate sealer; Store at RT |
| ● Assay Buffer AM3; Store at 4°C | ● 0.2 ml PCR stripwell tubes; Store at RT |
图1. Global DNA Methylation - LINE-1试剂盒的操作流程
Global DNA Methylation - LINE-1试剂盒的优势:
● 基于ELISA的操作，整个实验5小时内即可完成
● 可用于检测细胞或组织来源的人基因组DNA
● 使用试剂盒提供的甲基化和非甲基化DNA对照，可以对DNA样本中的5-
mC甲基化水平进行百分比定量分析；
● 将DNA片段与LINE-1探针杂交，可消除DNA被动吸附在96孔板时的差异。
● 可从低至10ng 的input DNA中检测到5-mC.（推荐起始用量为100ng/孔）
● 高灵敏度，可从100ng DNA片段中检测出低至0.5%的DNA甲基化。
|
图2. 使用Global DNA Methylation– LINE-1试剂盒来分析不同的细胞系及不同的处理方式下5-mC的水平。利用Global DNA Methylation– LINE-1试剂盒分析MseI酶切处理的来自HeLa细胞和0.05µM 5-azacytidine 处理的HeLa细胞DNA甲基化的水平。DNA的用量为100ng/孔。5-azacytidine 为DNMTs的已知抑制剂，经处理后DNA甲基化水平比未处理的HeLa细胞要低。使用试剂盒中的DNA标准品和曲线绘制软件，可以检测出每个DNA样本中5-mC的百分比含量。
|
|
图3. 图示Global DNA Methylation-LINE-1试剂盒制作的标准曲线
以5-mC的百分比(% 5-mC)含量为横坐标，OD450为纵坐标画散点图（三角形为DNA标准品，圆形为样本）。使用Readerfit software (https://Readerfit.com)拟合最适曲线，DNA样本中的5-mC的百分比含量可通过曲线推算出来。虽然试剂盒可检测到低至0.5%的DNA甲基化，但推荐标曲可检测的DNA甲基化的动力学范围为1%-13
|
试剂盒订购信息
| 产品编号 | 产品描述 | 规格 | 供应商 |
| 55017 | Global DNA Methylation - LINE-1 | 1 x 96 rxns | Active Motif |
