Cayman检测试剂盒(Assay kits)---细胞健康状态/细胞凋亡分析篇

7-AAD 细胞活性分析试剂盒产品编号: 10009856

Cayman提供的7-AAD细胞活性分析试剂盒，以7-AAD为荧光探针标记死细胞。7-AAD荧光染料不能进入活细胞但可进入受损细胞或死细胞，进而标记其DNA。虽7-AAD荧光强度不如PI，但其最大发射光波长较长(激发光波长488nm, 发射光波长650nm), 与PE或FITC发射光谱叠加较小。因此，7-AAD非常适用于同时用FITC或PE标记检测细胞表面分子或胞内抗原的实验。

编号	名称	规格	保存
400201	Cell-Based Assay 7-AAD Staining Stock Solution(1,000X)	1 Vials/50ul	4℃
400202	7-AAD Assay Fixative/Actinomycin D Solution	1 Vials/50ul	4℃
10009322	Cell-Based Assay Buffer Tablet	4 Tablets	Room Temperature

7-AAD/CFSE 细胞介导的细胞毒性检测试剂盒产品编号: 600120

Cayman提供的7-AAD/CFSE 细胞介导的细胞毒性检测试剂盒利用CFSE标记靶细胞，7-AAD标记死细胞。通过标记可区分四个细胞群。该试剂盒可快速简便的在单细胞水平检测免疫细胞的细胞毒性效应。

编号	名称	规格	保存
400201	Cell-Based Assay 7-AAD Staining Stock Solution(1,000X)	2 Vials/50ul	4℃
600121	CFSE Stock Solution	1 Vials/100ul	-20℃
10009322	Cell-Based Assay Buffer Tablet	4 Tablets	Romm Temperature

Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒产品编号: 600120

细胞凋亡早期的特点之一就是细胞膜磷脂的重新分布，如磷脂酰丝氨酸和磷脂酰乙醇胺从脂双层的内膜外翻，从而暴露于细胞表面。磷脂酰丝氨酸残基的外翻，可通过其高亲和力的结合蛋白Annexin V进行检测。Cayman研发的Annexin V凋亡检测试剂盒利用FITC标记的Annexin V作为探针，检测凋亡细胞膜外翻的磷脂酰丝氨酸。

图. 星孢菌素（Staurosporine）诱导RAW 264.7细胞凋亡。

凋亡空泡(Apoptosis Blebs)检测试剂盒产品编号: 600120

Cayman开发的凋亡空泡(Apoptosis Blebs)检测试剂盒，利用一个抗体单链可变片段的重组蛋白来进行检测，该抗体偏好性结合凋亡细胞膜空泡的自身抗原。该重组蛋白与蛋白A融合，再通过荧光标记的兔IgG进行检测。

图. A: 凋亡空泡(绿色)；B: 死细胞(红色)；C: 凋亡空泡(绿色); D: 细胞经星孢菌素处理，从凋亡到死细胞(橙色)

自噬/细胞毒性双染试剂盒产品编号： 600140

Cayman提供的自噬/细胞毒性双染试剂盒是在细胞水平研究细胞自噬和细胞毒性调控的便捷工具，试剂盒利用甲丹磺酰尸胺(monodansylcadaverine, MDC)自发荧光, 标记培养细胞的自噬泡结构。

图. 他莫昔芬(Tamoxifen)提高HepG2细胞自噬水平。 A: HepG2细胞经Vehicle处理, MDC染色(对照)；B：HepG2细胞经Vehicle处理, PI染色(对照); C：HepG2细胞经10uM的Tamoxifen, MDC染色；D: HepG2细胞经10uM的Tamoxifen, PI染色结果。

Caspase-3荧光检测试剂盒 产品编号: 10009135

Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是一个在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 3也称CPP32，Yama或apopain，有时被写作caspase-3或caspase3，属于caspase家族的CED-3亚家族 (CED-3 subfamily)，是细胞凋亡过程中的一个关键酶。 Caspase 3是哺乳动物细胞中研究最多的一个caspase酶。 Cayman研发的此款试剂盒利用Caspase-3催化其特异性底物 N-Ac-DEVD-N’-MC-R110，产生高强度荧光产物，可在485nm下被激发，发射光为535nm。同时，试剂盒也提供有活性的Caspase-3作为阳性对照。

细胞周期时相 (Cell Cycle Phase) 检测试剂盒产品编号: 10009349

Cayman提供的此款细胞周期时相检测试剂盒，可用于研究悬浮细胞样本中细胞周期进程的诱导和抑制。实验中涉及细胞的固定和破膜处理，可实现在完整细胞中利用PI对其DNA进行染色。

编号	名称	规格	保存
10009957	Propidium Iodide Reagent,powder	1 vial/1mg	4℃
10009322	Cell-Based Assay Buffer Tablet	2Tablets	Room Temperature
10009959	Rnase A Solution	1 vial/1ml	-20℃
10009960	CellCycle Phase Determination Fixative	1 vial/100ml	Room Temperature

CFSE细胞分裂检测试剂盒产品编号: 10009853

CFDA SE的全称为羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯(Carboxyfluorescein diacetate, succinimidyl ester)。CFDA SE可以通透细胞膜，进入细胞后可以被细胞内的酯酶(esterase)催化分解成CFSE，并保留于细胞内。由于CFDA SE标记细胞的荧光非常均匀和稳定，每分裂一次子代细胞的荧光会减弱一半，这样通过流式细胞仪检测就可以检测出没有分裂的细胞，分裂一次的细胞(1/2的荧光强度)，分离两次的细胞(1/4的荧光强度)，分裂三次的细胞(1/8的荧光强度)以及类似的其它分裂次数的细胞。在荧光减弱到未染色细胞的背景信号前，可检测分裂达8次的细胞。

图. 人外周血淋巴细胞增殖。A-C: CFSE标记的淋巴细胞（Day0, Day3, Day6）

JC-1线粒体膜电位检测试剂盒产品编号: 10009172

JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential) ∆Ψm 的理想荧光探针。JC-1有单体和多聚体两种存在状态，在低浓度时以单体的形式存在，高浓度时以多聚体形式存在，两者的发射光谱不同。在健康细胞中线粒体膜电位较高时，JC-1聚集在线粒体的基质(matrix)中，形成聚合物 (J-aggregates)，可以产生红色荧光；在线粒体膜电位较低时，JC-1不能聚集在线粒体的基质中，此时JC-1为单体(monomer)，可以产生绿色荧光。因此可方便地通过荧光颜色的转变来检测线粒体膜电位的变化。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可以很容易地检测到细胞膜电位的下降，同时也可用JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变作为细胞凋亡早期的一个检测指标。

图. 星形孢菌素(staurosporine)对Jurkat细胞线粒体膜电位的影响。A：未经星形孢菌素处理的细胞大多数具J-聚合物(红色)；B: 经星形孢菌素处理的细胞由于线粒体膜低电位，而被染成绿色。

LDH细胞毒性检测试剂盒产品编号: 10008882

LDH是一种可溶性的胞浆酶，在细胞凋亡或坏死导致细胞膜完整性丧失时，LDH从胞浆释放至细胞培养基中。因此，LDH的活性作为细胞膜完整性的一个检测指标，通常也作为评估化学物质或环境毒性因子的细胞毒性的检测方法。Cayman提供的LDH细胞毒性检测试剂盒可用于检测细胞培养基中LDH的活性，通过两步反应，产生有色产物-甲臢(formazan), 吸光度490-520nm。

多参数(Multi-Parameter)凋亡检测试剂盒产品编号: 600330

Multi Parameter Apoptosis Assay kit联合使用4种不同的试剂，同时检测多种凋亡事件。该独特的试剂盒利用FITC-Annexin V结合物作为探针检测质膜不对称性，用TMRE作为探针检测线粒体膜电位，用7-AAD作为膜通透性/细胞活力指示剂，再用Hoechst染料展示细胞核形态。

图. 星形孢菌素(staurosporine)诱导Jurkat细胞凋亡，细胞核形态变化、线粒体膜电位降低以及Annexin V-FITC标记的阳性细胞升高。图A-C为对照，图D-F为星形孢菌素处理。Hoechst染色显示大多数对照细胞具有完整的圆形细胞核(A)，而星形孢菌素处理的细胞则大多数呈浓缩、片段化的细胞核。TMRE染色显示大多数对照细胞线粒体膜电位未受干扰(B)，而星形孢菌素处理的细胞膜电位降低，未被染色。大多数对照细胞Annexin V染色阴性(C)，而处理组细胞染色大多数呈阳性，表明细胞正经历凋亡。

MTT细胞增殖检测试剂盒产品编号: 10009365

Cayman提供的MTT细胞增殖检测试剂盒可用于在任何体外模型中研究细胞增殖的诱导和抑制。也可用于筛选参与细胞周期调控的候选药物。在实验中，MTT被细胞摄入，经胞内NAD(P)H-氧化还原酶催化还原为甲臢(formazan) 。该实验可在3-4个小时内完成，无需洗涤步骤。

WST-1细胞增殖检测试剂盒产品编号: 10008883

WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。WST-1是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。试剂盒也可用于筛选参与细胞周期调控的候选药物。

WST-8细胞增殖检测试剂盒产品编号: 10010199

WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，在电子耦合试剂1-Methoxy PMS存在的情况下能够被还原成橙黄色水溶性的formazan。WST-8被细胞内脱氢酶生物还原后生成的formazan能够溶解在组织培养基中，生成的formazan量与活细胞数量成正比。实验的灵敏度比其它四唑盐如MTT, XTT, MTS或WST -1高。由于WST-8相当稳定，并且对细胞没有毒性，可直接加入到细胞样品中长时间孵育。

XTT细胞增殖检测试剂盒产品编号: 10010200

XTT化学名:2,3-bis(2-methoxy-4-nitro-5-sulfophenyl)-5-[(phenylamino) carbonyl] -2H-tetrazolium hydroxide，作为线粒体脱氢酶的作用底物，被活细胞还原成水溶性的橙黄色产物formazan。当XTT与电子偶合剂（例如PMS）联合应用时，其所产生的水溶性的formazan产物的吸光度与活细胞的数量成正比。检测快速、灵敏度高，甚至可以测定较低细胞密度，重复性优于MTT。试剂盒也可用于筛选参与细胞周期调控的候选药物。

Perfecta 3D^®培养细胞活力检测试剂盒产品编号: 600990

Cayman研发的此款 3D®培养细胞活力检测试剂盒是基于3D Biomatrix公司的细胞培养平台。 Perfecta3D®悬滴板是一个新的三维细胞培养平台，能够在多孔板模式中形成大小均匀的球状体悬滴；这种悬滴是细胞自组装形成的球状细胞簇，是三维（3D）细胞培养和筛选中研究的最有利的模型之一。同其他类型的3D支架和水凝胶等方法相比，这种球状体具有简单性，可重复性以及生理组织的相似性，能模拟组织肿瘤固有的代谢（氧气、二氧化碳、养分、废物）和增殖梯度变化。作为优良的生理肿瘤模型可以提供比2D细胞培养更可靠的结果。细胞增殖检测通过检测WST-1还原为formazan的反应。

【导读】

三维培养细胞活性及毒性检测
Assays For Three Dimensional Cell Spheroid Cultures

细胞培养于悬滴(hanging drop), 自组装形成球状细胞簇。 Cayman采用3D Biomatrix公司的3D细胞培养平台，开发出了两款全新的试剂盒用于研究Perfecta3D®培养板上的球状体(spheroid)细胞。即Perfecta3D®细胞活力检测试剂盒及Perfecta3D®细胞毒性检测试剂盒，可快速精准的检测球状体的一些基本细胞过程。

研究复杂的细胞和组织，及其信号传导与调控可不是件容易事。而模拟细胞或组织环境，建立最接近体内天然条件的实验系统同样困难。这就是3D细胞培养所面临的挑战，3D培养系统旨在更好的模拟细胞的体内生长环境。近来越来越多的证据表明，3D细胞培养系统比传统2D培养系统更贴近体内的生理条件。美国3D Biomatrix公司生产的Perfecta3D®悬滴板是一个新的三维细胞培养平台，能够在多孔板模式中形成大小均匀的球状体悬滴；这种悬滴是细胞自组装形成的球状细胞簇，是三维（3D）细胞培养和筛选中研究的最有利的模型之一。同其他类型的3D支架和水凝胶等方法相比，这种球状体具有简单性，可重复性以及生理组织的相似性，能模拟组织肿瘤固有的代谢（氧气、二氧化碳、养分、废物）和增殖梯度变化。作为优良的生理肿瘤模型可以提供比2D细胞培养更可靠的结果。

图1. Perfecta3D^®悬滴培养板促进细胞球体在悬滴中的培养。用移液器将细胞悬液加入每个孔，细胞自组装形成的球状细胞簇。

应用一. 细胞活性检测

在细胞研究中，对细胞活性及细胞毒理的检测是一项基本的细胞学技术，通常采用WST-1法。WST-1是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的可溶性formazan盐。Formazan产物的吸光度与活细胞的数量及活性成正比。

Cayman开发的Perfecta3D®细胞活力检测试剂盒（产品编号：600990）, 提供3D细胞培养板、WST-1试剂、电子媒介体溶液（Electron Mediator Solution）以及分析用的圆底板。如图2所示，HEK293细胞以不同细胞密度培养于悬滴中，设置Vehicle对照以及逐渐增加Triton X-100浓度的实验组（处理1小时）。然后转移细胞至圆底板，与WST-1溶液孵育，最后在450nm读数。OD值随细胞数升高，随Triton X-100浓度的升高而降低。

图2. 起始细胞数量对450nm吸光度的影响。HEK293细胞以不同起始细胞密度加入3D培养板，将培养板移入37度CO2孵育箱中。4天后，细胞经Vehicle, 0.001%或0.01% Triton X-100处理1小时，然后转移至圆底板，每孔加入WST-1试剂。细胞于37度孵育3.5小时后，于450nm测定吸光度。

应用二. 细胞毒性检测

细胞膜完整性的丧失是细胞毒性的表现形式之一，导致细胞的渗漏。LDH是一个可溶性的胞浆酶，可从受损细胞释放到培养基中，因此被用作细胞溶解、细胞毒性以及细胞活性等的标志分子。Cayman开发的Perfecta3D®细胞毒性检测试剂盒（产品编号：601050）提供3D细胞培养板以及检测LDH的必需试剂。细胞培养于悬滴中，通常含40-50ul的培养基，如要处理细胞，可移出10ul培养基，加入含有测试化合物的替换培养基。进行细胞毒性检测时，可移出10ul培养基，然后将细胞转移至标准的96孔板，用LDH试剂进行检测。490nm读数，吸光度与LDH浓度线性相关（图3）。

图3. LDH标准曲线。LDH标准品溶于不含FBS的RPMI 1640中，然后每孔加入100ul的反应液，室温孵育30分钟。