我们在做免疫荧光（IF），激光共聚焦(Confocal)，凋亡检测（TUNEL）时，免不了要制备细胞爬片，爬片质量完全决定了最后拍照的质量以及实验数据的精准性。今天，就教大家如何制备好的细胞爬片。

一. 实验材料及试剂

盖玻片、培养板、酒精灯、镊子等；75%乙醇、DMEM完全培养基（RPMI-1640完全培养基）、胰酶等。

二、实验内容

爬片准备：

1、24*24盖玻片，刚好用于6孔板。也可用更大的盖玻片，放在大的培养皿中爬片。

2. 盖玻片泡酸过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再置于无水酒清中浸泡6小时，再用三蒸水冲洗3遍（个人认为主要目的是将酸冲洗干净就可以了，如果不干净的话，细胞帖壁不好），放在饭盒或者玻璃培养皿中烘干后进行高压消毒、烤干。

3．盖玻片浸泡75%乙醇10分钟消毒，然后酒精灯上烤干，直接放入培养皿，开始种细胞。重点是玻片是干净的、无菌的。

4.盖玻片在液体中经常有贴壁吸附力，用一般镊子很难一次性夹起，将注射器针头针尖向背面弄个小钩，这样将爬片轻轻勾起，用小镊子取出就可以。

细胞进行爬片：

1. 胰酶消化细胞后计数重悬细胞于完全培养基中（悬浮细胞直接离心）。

2. 加细胞时，根据玻片的大小，先在每个孔里准备放爬片的位置滴少量培养基，目的是使玻片与培养皿靠培养基的张力粘合到一起，然后放玻片，防止加细胞悬液时玻片漂起，造成双层细胞贴片。整个过程注意无菌操作。

3. 根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可

保存细胞爬片时，一般用培养皿或避光湿盒，先在皿底放一层面巾纸，然后再放爬片，这样方便做实验时取片。然后盖上盖子，并在盖子上做标记，为避免混淆。一般-20℃保存2-3月的片子去拍照没有问题的。制备好的细胞爬片是不是很简单呢？

三、注意事项

1. 使用细胞爬片时（比如在六孔板中放入爬片，六孔板的孔底面积往往会比爬片面积多出一部分，加细胞悬液时常常就是细胞铺满整个孔底，有时细胞生长边集现象，就是靠近壁边缘密度要高些，这样处于中央玻片上爬的细胞数量就可能相对较少）。比较好的做法是将玻片放入孔板的孔内后，加细胞悬液时只滴到玻片上，一直滴到液体布满整个玻片又不会溢出玻片边缘。

2. 按照实验设计，作用一定时间后取玻片。注意细胞不能太密，否则容易掉片。